药学仪器分析论坛论文

三聚氰胺检测方法汇总检测方法GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺Spectra-Quad实现三聚氰胺含量在线检测超高效液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氰胺液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺附：三聚氰胺检测方法示例仪器与条件高效液相色谱仪；二极管阵列检测器(DAD)，检测波长240nm，柱温：40℃。(1)AgelaVenusilTMASBC18(×250mm);缓冲液：10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：。(2)AgelaVenusilTMASBC8(×250mm);流动相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为;流速：;离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX试剂与样品宠物饲料样品(农业部饲料供应中心提供);甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供;氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司;三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司);甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。实验方法1、样品前处理方法(1)标准样品配制：取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液(三氯乙酸)稀释至所要的浓度。(2)提取：称取饲料样品5g，加入三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。(3)净化(PCX小柱，60mg/3mL)：a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水b)上样：加入提取液3mLc)淋洗：3mL水;3mL甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。d)洗脱：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。e)浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。2、三聚氰胺被立案三聚氰胺HPLC-UV检测方法三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局(FDA)的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱，可以得到良好的分离效果：(a)色谱柱：×250mm;标准：FDA方法;流动相：缓冲液：乙腈=85：15;缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为;流速：;柱温：40oC;波长：240nm(b)色谱柱：×250mm;标准：中国农业部颁标准方法;缓冲液：10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15;流速：;柱温：40℃;波长：240nm空白加水平(mg/L)回收率三聚氰胺LC-MS检测方法由于FDA公布的HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，因此限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，不能得到较好的分离定量〔3〕。基于此问题，艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离。因此方法中流动相不含离子对试剂，可以用于质谱检测。与FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比较，该方法大大降低了最低检测限(MSD：;UV：2ppm)，提高了检测灵敏度。以该方法分别在××250mm得到很好的谱图。缓冲液：10mM的NH4AC;流动相：Buffer:：ACN=95：5;流速：;进样量：样品先用70%ACN溶解成约1mg/mL，用ACN稀释成，进10uL;柱温：40℃;波长：240nm结果与讨论1、阳离子交换柱(PCX)三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般应选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上，具有阳离子交换和反相吸附两种机理，并具有以下优点：a)可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度。b)批次重复性好。c)回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。2、LC-MS方法优点：(1)检测过程简便：无须添加离子对试剂，三聚氰胺就可得到良好的保留与分离，避免了配制离子对流动相的复杂过程。(2)提高了检测的灵敏度：无离子对试剂，可以用于质谱检测器，大大降低了最低检测限(MSD：;UV：2ppm)。(3)降低了检测成本：不用离子对试剂，就不再需要买价格较贵的离子对试剂了，从而降低了检测成本。(4)延长了色谱柱的使用寿命：避免了使用离子对试剂减少色谱柱寿命的影响。(5)该方法所使用的色谱柱具有通用性：无论是用FDA方法、中国农业部部颁标准方法和本公司开发的LC-MS方法，使用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱均能得到一个很好的检测结果，从而给客户提供了多种选择空间。国家食品质量监督检测中心有关人士说，在现有的国家标准奶粉检测中，主要进行蛋白质、脂肪、细菌等检测。三聚氰胺属于化工原料，是不允许添加到食品中的，所以现有标准不会包含相应内容。也就是说，三聚氰胺不属于常规检测项目，正常情况下，很少有人会想到去检测它。

临床药学体内药物分析课程的思考

随着仪器分析技术的不断发展，大型分析仪器的功能朝着灵敏度更高、重现性更好、应用范围更广的方向不断拓展，体内药物分析已深入应用到临床药学研究的各个方面并发挥重要作用。体内药物分析作为一门方法学，与药物分析一样，实验能力的培养是课程教学的重要组成部分，在理论课的基础上开设实验课程是必然的。

摘要： 对药学院目前的体内药物分析课程设置及教学中所存在的问题做了总结和分析，特别是针对临床药学专业开设体内药物分析的重要性与必要性做了阐述;指出目前该课程的教学现状及其存在的主要问题，并一一提出可行性的解决方案，希望对我校体内药物分析课程教学进行改革，提高该课程教学质量进而加强对临床药学专业学生的全面培养，成为符合专业发展的全方位人才。

关键词： 体内药物分析;临床药学;教学改革

体内药物分析是药物分析学的一个重要分支，是一门研究生物机体中药物及其代谢产物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学，通过分析的手段了解药物在体内的数量与质量的变化，获得各种药物代谢动力学的各种参数和在体内的吸收、分布、代谢和排泄的情况[1]，也可以了解其与机体内的生物大分子(如蛋白质分子)之间的相互作用的情况，探索其在体内的代谢途径和代谢方式在治疗药物监测、药代动力学研究、药理毒理学研究及临床合理用药中具有重要意义。体内药物分析课程的教学目标是培养学生独立进行体内药物分析实验设计及操作的能力。本文总结了目前我校体内药物分析课程的课程设置及教学中存在的问题;思索和探讨教学方法的改进，以提高该学科的教学质量及深化此学科在实际问题中的应用。

1教学中存在的问题

课程设置不当

目前我校将体内药物分析课程作为专业考查课，仅在临床医学院药学专业学生的大三下学期开设这门课程，而对药学院临床药学和药学专业的学生均没有要求。体内药物分析最初应用于临床治疗药物检测和制剂生物利用度的测定，之后随着分析技术的不断发展和分析仪器功能的持续升级，体内药物分析开始与临床药理学紧密联系，成为研究药物体内过程的基础方法和手段[2]。我国目前开设临床药学专业的院校中，沈阳药科大学、复旦大学和广东药学院均将体内药物分析课程作为主要专业课程，其在临床药学工作中的重要作用可见一斑[3-4]。

教学方式亟待改进

体内药物分析课程作为考查课，结束阶段的考核形式多以开卷考试为主，试卷内容多以教材内容为主，实验设计题只占很小一部分;学生大多在考前大量复印考试资料、笔记及课件即可应对考试;难免导致学生将体内药物分析与其他专业课程区别对待，上课时经常出现有旷课和逃课的现象，按时到课的同学也只有少数在认真听讲、自主思考;大多数同学在玩手机、背单词或者是做考研复习题等等;这样一来自然达不到教学的目的。当然，从另一方面来看，学生的学习积极性不够，除了课程设置的原因之外，课堂教学缺乏吸引力也是一个重要的原因;教学方式还过于程式化，对于考查课，在被学生与专业课区别对待的同时，教师也未能引起足够的重视，教学方法简单，没有创新，教材陈旧，是目前体内药物分析课堂教学所存在的主要问题[5]。

实验教学缺乏

我校目前的体内药物分析课程由30个学时的理论课教学组成，并没有安排实验课的相关内容。体内药物分析是一门理论与实践联合相当紧密的学科，实际操作环节的重要性和理论知识掌握同等重要，甚至更为重要[6]。体内药物分析的教学目标中包括：熟悉生物样本分析方法的建立不正和方法验证的内容与要求;掌握生物样本预处理方法的特点及其应用;了解药物代谢动力学实验设计和药动学参数计算。可见，主要的教学目标还是需要依靠实验教学辅助来更好的完成。实验课程可以帮助学生将教材上所学到的抽象理论具体化;将在理论课上所学到的分析方法实实在在的`用在具体问题的解决上，加深对理论知识的理解和掌握，同时又可以培养和提高学生的实验操作能力，从而全方面的提高学生的专业素养。仅仅开展理论课教学而忽视实验课教学，难免有“纸上谈兵”的问题出现[7]。

2对存在问题的解决方法的思考

为临床药学专业开设体内药物分析课程

临床药学专业的主要特色是将药学与临床医学相结合，开展临床药学工作是保障患者临床用药安全、有效、经济的重要措施，临床药学的发展对临床药物治疗水平的提高起着积极的推动作用，不同层次的医疗机构都应该配备相应数量的临床药师以便为患者提供更高质量的医疗服务[8]。目前我国临床药师在临床上的工作内容繁多，其中进行治疗药物浓度监测就是体内药物分析课程知识在临床最基础的实际应用。体内药物分析与其他药学专业课关系紧密，地位显著，是药学领域中的“眼睛”学科，为现代药学的发展提供重要的方法学。因此，在临床药学专业开设体内药物分析课程，通过理论课的学习和实验课的演练，促使学生既可以掌握扎实的理论知识，另一方面提高应用现代体内药物分析技术为临床药学服务的水平，使学生成为高质量临床药学人才[9]。

教学方式的改革创新

合理调整教学内容

目前我院体内药物分析课程所使用的教材为人民卫生出版社出版，李好枝主编的《体内药物分析》第六版教材。教材的主要内容由总论和各论两部分组成[10];总论主要介绍体内药物分析的意义，发展;生物样品的种类、预处理方法及分析方法的建立与评价等理论知识。各论介绍体内药物分析方法在治疗药物监测、药代动力学研究、滥用药物检测、内源性物质测定、体内手性药物测定、中药药动学研究、体内微量元素测定等七个方面的实际应用。根据自身教学经验的总结，我们在课堂教学中把主要内容做了相应的调整;总论部分是本课程的基础理论，需要重点详细介绍;而各论部分，由于分析方法在各方面的应用有所重叠，我们在实际教学中采取先集中讲述如治疗药物检测、药代动力学研究等应用的相关知识，然后详细介绍各种分析方法，以色谱法为主，并重点介绍目前分析领域较为前沿的分析技术，如色谱联用技术、免疫分析方法、成像技术(放射自显影成像、质谱成像、光谱成像)等，在介绍各种分析方法的同时将代表性药物的实际应用作为实例进行讲解，这样学习的脉络更加清晰，学生更好掌握。

改变和完善教学手段

理论课内容的传统教学方式“老师说，学生听”的这种模式，很容易让学生觉得枯燥而无法集中精力;在教学过程中我们应该尽可能尝试多种教学手段结合并相互辅助[11-12]，丰富我们的课堂教学方式，如采用PBL式教学(Problem-BasedLearning，以问题为导向的教学方法)、专题教学、探究式教学等，积极推进学生自主学习;为了将枯燥而又抽象的内容具体化，可以尽可能的利用多媒体教学的手段，在教学课件中插入丰富的图片、短片及视频。不仅可使课堂气氛活跃，生动，增加老师和学生的互相交流，并且使得学生对实验方法有了直观的了解，产生影像记忆。而对于大型仪器的介绍及操作，由于无法让学生自己动手操作，课时限制也无法做多组的分组示教，也可采用相应的以图片和视频相结合的方式教学。

重新拟定考核方式及评价标准

单一的考核方式无法全面评估学生的学习成果，将考核方式改为平时成绩、期中成绩、实验成绩以及期末考试成绩三项结合的形式。平时成绩占15%，主要包括考勤、课堂参与等方面;期中成绩占15%，由学生课程期间要求上交的论文质量或者课堂上所布置的课外作业完成情况进行评判;实验成绩占30%，由实验课考勤、实验报告成绩以及实验考核成绩决定;期末考试成绩占40%。通过这种考核方式，使得考核能够从基础知识的掌握、学生的学习态度、学生查阅文献，自主思考的能力、分析和解决问题的方式等多方面考核学生;提高学生对课程的重视程度以及调动学生学习的积极性。

开展实验教学

体内药物分析作为一门方法学，与药物分析一样，实验能力的培养是课程教学的重要组成部分，在理论课的基础上开设实验课程是必然的。相对于药物分析的实验主要以培养学生的基本实验技能和操作的规范而言，体内药物分析实验教学应更加强调“实验方法”的传授[13-14]。目前国内的体内药物分析本科教学的实验课程内容大多数是以验证性实验为主，学生按部就班的对照讲义中的实验步骤操作即可，缺乏创新和自我思考的部分;鉴于我校临床药学专业的专业特点，临床治疗药物监测和生物利用度的测定是与专业联系较为紧密的实验内容，以此作为实验课的基础验证性试验教学内容;除此之外开展综合性设计型实验教学才能与专业相结合，以达到教学目的。在实验题目选择上，可以参考教研室正在进行的科研项目，选取一些具有相关性的题目，学生在课外时间也可以进行观察、参与，感受科研氛围，并全面掌握实验的流程。

3结论

随着仪器分析技术的不断发展，大型分析仪器的功能朝着灵敏度更高、重现性更好、应用范围更广的方向不断拓展，体内药物分析已深入应用到临床药学研究的各个方面并发挥重要作用。为了是临床药学专业的学生毕业进入临床工作时能够更加胜任相关工作，在本科教育阶段为临床药学专业开设体内药物分析课程有其必要性，通过对体内药物分析教学内容的完善、教学方法的创新，实验技能的学习，可以使学生更好的掌握专业理论，熟练掌握实验方法，成为适应临床药学发展需求的人才。

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